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        小鼠促腎上腺皮質激素釋放因子ELISA試劑盒操作步驟
        更新時間:2011-04-08 點擊次數:2282

                              小鼠促腎上腺皮質激素釋放因子ELISA試劑盒操作步驟

        1.         標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

        400ng/L
        5號標準品
        150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
        200ng/L
        4號標準品
        150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
        100ng/L
        3號標準品
        150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
        50ng/L
        2號標準品
        150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
        25ng/L
        1號標準品
        150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液

         
         
        2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
        3.         溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  
        4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
        5.         洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
        6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
        7.         溫育:操作同3。
        8.         洗滌:操作同5。
        9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
        10.     終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
        11.     測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

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